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蓝舌病病毒实时荧光定量PCR试剂盒
  • 英文名:BLUV Ag
  • 别   称:Real-Time PCR Method
  • CAS号:YS300601
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YS300601 50T 3200.00 加入购物车 咨询客服
  • 产品描述

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 【预期用途】

本试剂盒利用实时荧光PCR原理,定性检测蓝舌病病毒,对蓝舌病病毒引起的疾病诊断及疗效评估有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒针对蓝舌病病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针,在反应体系中含蓝舌病病毒基因组模板的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。

【主要组成成份】

序号

组成

25T/

50T/

1

BLUV RT-PCR反应液

375 μL×1

750 μL×1

2

BLUV逆转录酶

 50 μL×1

100 μL×1

3

BLUV Taq

 75 μL×1

150 μL×1

4

BLUV阳性对照

 40 μL×1

 40 μL×1

5

BLUV阴性对照

 40 μL×1

 40 μL×1

6

说明书

1

1

注:阴性对照为偶蹄兽类基因组DNA,阳性对照为失去活性的蓝舌病病毒cDNA

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480Cepheid SmartCyclerRotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1. 适用标本类型:发病动物血液、空肠及小肠肠内容物及组织脏器(肠道组织、肠系膜及淋巴结等)和病毒培养液。

2. 标本采集,方法如下:

(1) 血清:用一次性注射器取静脉血2-3ml,转至5ml 的干燥管中,密闭送检。

(2) 肠内容物:无菌条件下取肠道内容物约1g 左右,置入1ml 含有1.0ml PBS(或生理盐水)5ml 离心管中,立即送检。

(3) 组织脏器:取发病动物肠道组织及肠系膜淋巴结等组织约1g,置一1.5ml的洁净离心管中,密闭送检。

3.应避免标本间交叉污染。

4.标本收集后可立即检测;若不能立即检测,可置于28℃冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-80以下,避免反复冻融。

【检验方法】

1. 试剂准备(试剂准备区)

1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数(1T+阳性对照数(1T+误差预留量(1T+样本数

单反液配制表(每份)

RT-PCR反应液

15.0 μL

逆转录酶

 2.0 μL

Taq

 3.0 μL

 (3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

2.样本准备(样本处理区)

QIAGENRoche公司RNA提取试剂盒提取RNA,具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA5 μl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

4. PCRPCR扩增区)

1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。

2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

 

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