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牛结核分支杆菌实时荧光定量PCR试剂盒
  • 英文名:M. bovis
  • 别   称:Real-Time PCR Method
  • CAS号:YS300401
  • 保质期:12个月
  • 存储条件:-20℃
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YS300401 50T 3200.00 加入购物车 咨询客服
  • 产品描述

  • 注意事项

  • 参考文献

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 【检验原理】

 

本试剂盒针对牛结核分支杆菌基因设计特异性引物和分子信标探针,在待检样本中含有牛结核分支杆菌DNA的情况下,PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应荧光信号进行实时监测和输出,实现检测结果的定性分析。

【主要组成成份】

序号

组成

25T/

50T/

1

 牛结核分支杆菌 PCR反应液

 437.5 μL×1

875 μL×1

2

牛结核分支杆菌 混合酶液

  62.5 μL×1

125 μL×1

3

牛结核分支杆菌 阴性对照

   40 μL×1

 40 μL×1

4

牛结核分支杆菌 阳性对照

   40 μL×1

 40 μL×1

5

说明书

1

1

注:阴性对照为不含牛结核分支杆菌的其它菌的混合物,阳性对照为灭活的牛结核分支杆菌

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反复冻融,有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480Cepheid SmartCyclerRotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1. 如使用原始标本进行检测。标本(病人脑脊液、静脉血、关节液;病畜静脉血,乳汁;菌落,菌苔等)应为新鲜采集并使用双蒸灭菌水或灭菌生理盐水悬浮的原始标本。

2. 如需在增菌后进行PCR检测,则应使用选择性增菌液对原始标本进行增菌。

3. 标本收集后若不能立即检测,可置于28℃冷藏过夜保存;如需长期保存,标本应冻存于-20-80

【检验方法】

1. 试剂准备(试剂准备区)

1)从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂,充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

2)核算当次实验所需要的反应数(n),并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数(1T+阳性对照数(1T+误差预留量(1T+样本数

单反液配制表()

PCR反应液

17.5 μL

混合酶液(Taq+UNG酶)

 2.5 μL

(3)在无菌离心管中加入上述试剂,充分混匀后瞬时离心。按照20μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

(4) 盖紧PCR反应管盖后将PCR反应管转移至样本处理区。剩余试剂放回-20℃以下冰箱冷冻保存。

2.样本准备(样本处理区)

QIAGENRoche公司DNA提取试剂盒提取DNA,具体操作按照其试剂盒说明书操.

3.加样

在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本DNA5 μl、终体积25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品,终体积为25 μl/管,盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心,转移到PCR仪器上。

4.PCRPCR扩增区)

1)取样本处理区准备好的PCR反应管,放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置,并记录放置顺序。

2)按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。


反应体积

25 μL

通道选择

FAM通道采集牛结核分支杆菌荧光信号

PCR

反应

条件

步骤

条件

循环数

UNG处理

50℃2分钟(min

1

预变性

95℃3分钟(min

1

预扩增

95℃5秒(s

5

55℃40秒(s

PCR扩增

95℃5秒(s

40

55℃40秒(s

(此阶段结束时采集荧光信号)

注:ABI系列荧光PCR仪在设置时不选ROX校正,设置淬灭基团选择None

【参考值(参考范围)】

1.试剂盒有效性判定:

1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或

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