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通用型全基因组扩增试剂盒
标签:全基因组扩增试剂盒  来源:雅吉生物  2019-07-13  浏览:119次

 

产品及特点

本产品是用于基因组DNA扩增全基因组的试剂盒,可以方便、简单、快速、经济的得到稳定产量的基因组DNA扩增样品。本产品有如下优点:

1. 基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和超强链取代能力。

2. 可以扩增基因组达上万倍,具有高产量和高保真性的特点。

3. 可使用各种来源的样品,包括全血,干血,发根,口腔粘膜刮液培养细胞, 真菌和病毒等。

4. 操作简便快捷,恒温(30℃)反应,无须PCR仪即可实现扩增。

5. 产物可用于多种后续试验,包括多重PCR、长片断PCR、定量PCR、克隆、 文库构建、单倍型分析、测序、基因芯片分析、各种遗传分析片段差异,

微卫星差异,SNP,STR)等。

规格及成分

 

成 份

编 号

十孔盒包装

 

变性液

100941a

62.5 uL

中和液

100941b

125 uL

WGA Mix

100941c

250uL

Phi 29 DNA 聚合酶10U/uL

100941d

12.5uL

使用手册

100941sc

1 份

自备试剂

超纯水(无 DNA 和 DNase 污染)

运输及保存

低温运输、-20℃保存, 有效期一年。

使用方法

本产品适用于纯化好的基因组DNA。

 

一、碱变性(碱变性法一般好于热变性法,推荐用户使用)

 

1. PCR 塑料管中加入不超过 2.5uL 纯化好的基因组DNA 或用量在100pg-100ng之间。如果体积不足2.5uL,则用超纯水补齐。最好同时做 一个不加DNA模板的阴性对照。

2. 加入等体积2.5μL)变性液,轻柔吹打混匀。

 

3. 室温放置2-5分钟。

4. 加入5uLWGA中和液。此时样品总体积为10uL。二、WGA反应


 

1. 在10uL DNA样品中,加入10 μLWGA Mix,轻柔吹打混合均匀。

 

2. 加入0.5 uL Phi 29 DNA聚合酶(10U/uL)轻柔吹打混合均匀。

 

3. 30℃保温3-12小时。最好使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴,最好在样品管中加入30-50uL石蜡油以防水分蒸发,因      为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁,从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高,WGA三小时即可检测到DNA扩增。

4. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注:由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性,所以最好将其灭活以免干扰后续反应。

5. 立即取5-10 uL WGA反应液进行电泳检测扩增效果。

 

6. 扩增的DNA可以用于后续试验或当冰箱长期保存。

使用效果

 

 

 

用本产品扩增 10 ng 纯化好的藻基因组DNA,反应体系为 10 μL,扩增时间为 8 h。5 μL 样品电泳,第一泳道为 Marker(大片段为 15  Kb,第 2~5 泳道扩增样品的引物浓度分别为 100,200,300,400 μM染料为绿如蓝核酸染料(CAT#70303)。

(实验编号:103045)

 

技术资料

WGA 原理图圆球表示phi 29DNA 聚合酶

短蓝线表示随机引物

棕色线表示新合成的DNA

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